Maraming mga enzyme na karaniwang ginagamit sa mga eksperimento sa PCR

Polymerase chain reaction, dinaglat bilangPCRsa Ingles, ay isang molecular biology technique na ginagamit upang palakihin ang mga partikular na fragment ng DNA.Maaari itong ituring bilang isang espesyal na pagtitiklop ng DNA sa labas ng katawan, na maaaring lubos na magpapataas ng napakaliit na halaga ng DNA.Sa panahon ng buongPCRproseso ng reaksyon, ang isang klase ng mga sangkap ay gumaganap ng isang mahalagang papel - mga enzyme.

1. Taq DNA

Sa mga eksperimento sa mga unang araw ngPCR, ginamit ng mga siyentipiko ang Escherichia coli DNA polymerase I, Ngunit may problema sa enzyme na ito: kailangan nitong maglagay muli ng bagong enzyme tuwing may cycle na ginagawa, na ginagawang bahagyang kumplikado ang mga hakbang sa operasyon at mahirap na ganap na awtomatikong palakihin.Ang problemang ito ay nalutas matapos aksidenteng ihiwalay ng mga siyentipiko ang Taq DNA polymerase mula sa Thermus aquaticus noong 1988. Simula noon, ang awtomatikong pagpapalakas ng DNA ay naging isang katotohanan.Ang pagtuklas ng enzyme na ito ay gumagawa dinPCRteknolohiya isang maginhawa, praktikal at unibersal na teknolohiya.Sa kasalukuyan, ang Taq DNA polymerase ay ang pinakakaraniwang polymerase sa mga DNA kit.

2. PfuDNA

Tulad ng nabanggit sa itaas, may malaking bug ang Taq DNase, kaya binago ng mga siyentipiko ang Taq DNA polymerase sa isang tiyak na lawak upang maiwasan ang hindi partikular na amplification dahil sa hindi pagkakatugma, na nagreresulta sa hindi tumpak na mga resulta ng pagsubok.Ngunit ang pagbabago ng Taq DNA polymerase ay maaaring pagbawalan ang aktibidad ng DNA polymerase sa temperatura ng silid.Ang PfuDNA polymerase ay maaaring makabawi sa mga disadvantages sa itaas ng Taq DNA polymerase, upang ang reaksyon ng PCR ay maisagawa nang normal, at ang rate ng tagumpay ng target na gene amplification ay maaaring epektibong mapabuti.

3. Reverse Transcriptase

Ang reverse transcriptase ay natuklasan noong 1970. Ang enzyme na ito ay gumagamit ng RNA bilang isang template, ang dNTP bilang isang substrate, ay sumusunod sa prinsipyo ng base pairing, at nag-synthesize ng isang DNA single strand na pantulong sa template ng RNA sa direksyon na 5′-3′.Ang reverse transcriptase ay pangunahing nakasalalay sa aktibidad ng DNA polymerase mula sa mga template ng DNA o RNA at samakatuwid ay walang aktibidad na 3′-5′ exonuclease.Gayunpaman, mayroon itong aktibidad na RNase H, na naglilimita sa haba ng synthesis ng reverse transcriptase sa isang tiyak na lawak.Dahil sa mababang fidelity at thermostability ng wild reverse transcriptase, binago din ito ng mga siyentipiko.

Para saPCRmga eksperimento, ang pangunahing mga consumable ay:indibidwal na PCR tube, 4/8-strip PCR tube, PCR plates.

kay LabioMga consumable ng PCRmagkaroon ng mga sumusunodmga pakinabang:

Mga plato ng PCR: Malawak na thermal cycler compatibility;High-contrast, madaling mahusay na pagkakakilanlan;well fluorescence reflection;mabutipaglipat ng init;Certified DNase, RNase, DNA, PCR inhibitors, at nasubok na walang pyrogen.

Mga indibidwal na tubo ng PCR: Pagsingaw-lumalaban;mabutipaglipat ng init;mahusay na optical clarity;Certified DNase, RNase, DNA, PCR inhibitors, at nasubok na walang pyrogen.

4/8-strip na PCR tubes: Mga ultra-manipis na pader; mataas na kalinawan; magandang pagmuni-muni ng fluorescence;maaaring gamitin sa industriya ng parmasyutiko, industriya ng pagkain, at molecular biology; mataas na kalidad, virgin na materyal na PP; Certified DNase, RNase, DNA, PCR inhibitors, at nasubok na walang pyrogen.